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如何测定饲料菌体蛋白中的真蛋白?
 实验室常用考马斯亮蓝G-250法,不是以测定"氮"含量为基础。马斯亮蓝是一种甲基取代的三苯基甲烷,分子中磺酸基的蓝色染料,在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质-考马斯亮蓝复合物蓝色溶液,引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移,在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质-考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收,因此,可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质-考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定,适合于蛋白质类的定量分析,呈色反应颜色稳定、灵敏度高,最低测试蛋白质量在1ug左右。但是考马斯亮蓝G250分子含苯环。
也可以用“紫外吸收法”,它也不是以测定“氮”含量为基础,其中以280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。其原理是蛋白质分子中酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比,利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定,三聚氰胺等化合物含有共轭双键的苯环,但是没有肽键,所以238nm处的吸光度值可以排除其它苯环共轭双键的干扰。
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